1. Pri određivanju endotoksina u krvi obratiti pažnju na odabir metoda i reagensa.

2. Priprema plazme ili seruma

Kao uobičajeni klinički uzorak, plazma je glavni uzorak, a njezina je stopa iskorištenja veća od 95%. Stoga je vrlo važno pripremiti plazmu kao glavni dio tjelesne tekućine. Prema Dasu, endotoksin je općenito osim u slobodnom stanju vezan za trombocite, pa je prikladnije kao uzorak koristiti plazmu koja sadrži veliki broj trombocita. Kod pripreme ljudske plazme ili životinjske plazme, trenutno, kako bi se spriječilo oštećenje stanica, strane zemlje uglavnom koriste separaciju na niskoj temperaturi, koristeći uzorke plazme koji sadrže veliki broj trombocita, to jest, na 4 ℃ 1000gx10 minuta uvjeta separacije, ili 3000gx40 sekundarni uvjeti odvajanja kada nema niskotemperaturne centrifuge. Nije dopušteno provoditi brzo i dugotrajno odvajanje pri normalnim temperaturama. Osim toga, pri odvajanju plazme ili seruma treba izbjegavati bakterijsku kontaminaciju.

Priprema seruma: pomoću štrcaljke bez antikoagulansa prikupite krv i prenesite je u epruvetu za centrifugu, te je stavite u kupelj s ledenom vodom 30 minuta, na 4 ℃, 1000xg, 10 minuta za centrifugiranje.

Nakon odvajanja plazme ili seruma, ako se privremeno ne koriste, mogu se zamrznuti na - 80 ℃ i upotrijebiti unutar 1 mjeseca. Napomena Kako biste izbjegli adsorpciju endotoksina, koristite staklenu epruvetu za pohranu.

3. Vrste i djelovanje antikoagulansa

Tijekom pripreme plazme, zbog dodavanja određenih antikoagulansa, vrsta i količina antikoagulansa ima veliki utjecaj na brzinu oporavka. Općenito, uobičajeno korišteni antikoagulansi uglavnom uključuju heparin, natrijev citrat i EDTA, među kojima se heparin najčešće koristi. Međutim, znamo da će velika količina heparina ometati reakciju endotoksina, posebno za metodu zagrijavanja razrjeđivanja i metodu ekstrakcije kloroformom, što će smanjiti stopu oporavka, ali će imati manji utjecaj na PCA metodu, tako da je dodana količina heparina i oslobađa se tijekom pripreme plazme dovoljno je samo 2~5 μL/ml.