1. Dodavanje uzoraka: dodajte razrijeđeni uzorak u obloženu ploču, razrijedite serum u PBS-u ili fiziološkoj otopini u omjeru 1:20, a zatim dodajte 10 ul u reakcijske jažice mikroploče.

2. Dodatak kontroli: negativna kontrola s 3 jažice, pozitivna kontrola s 1 jažicom i kontrolni serum od 100 ul.

3. Inkubacija: Protresite reakcijsku ploču da se uzorak dobro promiješa i zatim je stavite u inkubator na 37 °C ili vodenu kupelj na 20 minuta.

4. Pranje podova: 15 ml otopine za pranje razrijedite u 300 ml destilirane vode. Prilikom ručnog pranja, sadržaj zraka reakcijske ploče treba izliti i staviti u rupu ispunjenu tekućinom za pranje, a zatim ostaviti 30 da se snažno protrese. Ponovite ovu operaciju 5 puta i osušite. Stroj treba raditi 5 puta. 200 ul otopine za pranje može se ubrizgati u svaku jažicu ili napuniti, zatim ostaviti 30 minuta i upijati.

5. Dodajte enzimom obilježenu radnu otopinu: dodajte 100 ul enzimom obilježenu radnu otopinu u svaku jažicu u inkubatoru na 37 °C i operite ploču pet puta nakon 20 minuta. Ploča za pranje je ista kao u koraku 4.

6. Ovo je posljednji korak reakcije, s razvojem boje i završetkom reakcije: 50 ul supstrata doda se u reakcijsku jažicu i boja se razvija 10 minuta u mraku na 37 °C. Otopina u svakoj jažici je zaustavljena i miješati da se prekine reakcija. Korištenje mikropločica provodi se u sterilnim uvjetima. Pažljivo dezinficirajte i očistite pločice nakon upotrebe, ali imajte na umu da je za neke pločice potrebno pažljivo pročitati upute kako biste vidjeli mogu li se sterilizirati na visokim temperaturama.