Kao pomoćni materijal u eksperimentima ELISA detekcije, enzim tanjur igra odlučujuću ulogu i izravno utječe na konačne eksperimentalne rezultate. Kvaliteta Enzimska ploča uglavnom ovisi o njegovoj osjetljivosti na adsorpciju proteina, razlici u kapacitetu adsorpcije proteina između ploča i rupa i razlici između serija kupljenih enzimska ploča . Stoga odabir an enzimska ploča proizvod s visokom osjetljivošću na adsorpciju proteina, mala razlika između rupa u kapacitetu adsorpcije proteina i mala razlika između serija jamstvo je za eksperimentatora da dobije pouzdane i stabilne eksperimentalne rezultate.

Enzimska ploča klasifikacija: prema različitim klasifikacijskim standardima, ploča ima različite klasifikacije.

1: Prema broju rupa, može se podijeliti na 96 rupa, 48 rupa, itd. Budući da enzimska ploča uglavnom se koristi s čitačem mikropločica, tanjur metar na tržištu ima najviše 96 rupa, tako da mikroploča ima 96 rupa.

2: Prema različitim dnima, dijeli se na ravno dno, U dno, V dno itd.

Indeks loma ravne baze je nizak, što je pogodno za detekciju u mikroploči;

T Indeks loma U mikroploče je visok, pogodan za uzorkovanje, uzorkovanje i miješanje i može izravno promatrati promjenu boje bez stavljanja na mikroploču, kako bi se utvrdilo postoji li odgovarajuća imunološka reakcija.

Mikroploča V baze može točno apsorbirati uzorak.

3: Prema različitim sposobnostima vezivanja mikroploče i proteina i drugih molekula, dijeli se na visoku silu vezivanja, srednju silu vezivanja i aminaciju.

(1) Visoka snaga vezivanja

Nakon površine ove mikroploče, njegova sposobnost vezanja proteina je znatno poboljšana, do 300~400 ng IgG / cm2, a molekularna težina glavnog vezanog proteina je> 10 kD. Korištenje ove klase mikroploča može poboljšati osjetljivost i može relativno smanjiti koncentraciju i količinu obloženog proteina, što je lakše proizvesti nespecifične reakcije. Nakon premazivanja antigenom ili antitijelom, neionski deterdžent ne može učinkovito zatvoriti mjesto nevezanog proteina, pa bi se protein trebao koristiti kao sredstvo za brtvljenje.

(2) Srednja snaga vezivanja

Takve mikropločice pasivno se vežu za protein preko hidrofobnih veza na površini, te su prikladne kao nosači u čvrstoj fazi za makromolekularne proteine ​​molekulske mase > 20 kD, s kapacitetom vezanja proteina od 200 do 300 ng IgG/cm2. Zbog karakteristika svog jedinog vezanja na makromolekule, prikladan je za nositelje čvrste faze kao nepročišćena antitijela ili antigene kako bi se smanjila mogućnost nespecifične križne reaktivnosti. Ploča može biti inertni protein ili neionski deterdžent kao otopina za brtvljenje.

(3) Aminacija

Ova mikroploča nakon modifikacije površine ima pozitivno nabijenu amino skupinu, čija je hidrofobna veza zamijenjena hidrofilnom vezom. Ova klasa mikroploča prikladna je kao nosač čvrste faze za proteine ​​malih molekula. Koristeći odgovarajući pufer i pH, površina se veže na negativno nabijene male molekule putem ionskih veza. Zbog hidrofilnih svojstava svoje površine i sposobnosti da se kovalentno veže s drugim poprečnim povezivačima, može se koristiti za fiksiranje proteinskih molekula topljivih u dekontaminacijskim sredstvima kao što su Triton-100, Tween 20, itd. Nedostatak ove ploče je zbog smanjene hidrofobnosti; štoviše, površina mora biti učinkovito zatvorena. Zbog hidrofilnih i kovalentnih površinskih svojstava, upotrijebljena otopina za brtvljenje mora biti sposobna komunicirati s bilo kojom funkcionalnom skupinom u nereaktivnoj amino skupini i odabranim sredstvom za umrežavanje.

4. Prema boji se dijele na prozirne, crne i bijele.

Transparent se najčešće koristi za najopćenitije eksperimente enzimske imunizacije. U Relcontrastu osim prozirne mikroploče postoje i neprozirne mikropločice za svjetlosnu detekciju, općenito crno-bijele. Sama crna mikroploča ima apsorpciju svjetlosti, tako da je njen signal puno niži od bijele mikroploče, pa se općenito koristi za detekciju jakog svjetla, kao što je detekcija fluorescencije. Bijela mikroploča koristi se za detekciju slabe svjetlosti, često se koristi za opću kemiluminiscenciju. Osim toga, crna mikropločica također može oslabiti problem nespecifičnih reakcija. U isto vrijeme, važno je napomenuti da s općom mikropločom ne može biti svjetlosne detekcije, jer je svjetlost emitirana iz reakcije kemiluminiscencije izotropna, ako se, s prozirnom mikropločom, svjetlost neće širiti samo iz okomitog smjera, nego ali i iz vodoravnog smjera, lagano stvarajte svjetlost kroz razmak između rupe i stijenke rupe, što rezultira svjetlom vrijednosti apsorpcije svjetlosti rupe pod utjecajem svjetla koje emitira susjedna rupa.

Dobra mikroploča trebala bi imati dobru adsorpcijsku učinkovitost, nisku slijepu vrijednost, visoku prozirnost dna rupice i sličnu učinkovitost između ploča i između rupica iste ploče. Zbog razlika u sirovinama i razlikama u proizvodnom procesu, kvaliteta raznih proizvoda je vrlo različita, stoga se učinkovitost svake serije mikroploče mora provjeriti unaprijed prije uporabe. Uobičajene metode inspekcije su određene koncentracije humanog IgG (općenito 10 ng/ml) obložene jažicama ELISA ploče, nakon ispiranja, dodavanjem odgovarajućeg razrjeđenja enzimom obilježenog anti-humanog IgG protutijela u svaku jažicu, ispiranje nakon čuvanja toplinom, dodavanjem boje supstrata, zaustaviti reakciju enzima i izmjeriti apsorbanciju otopine u svakoj jažici. Uvjeti reakcije su kontrolirani tako da je očitanje svake jažice održavano na apsorbanciji od oko 0,8. Izračunat je prosjek ukupnih očitanja. Razlika između srednje vrijednosti svih pojedinačnih očitanja i svih očitanja mora biti manja od 10%. Sljedeće tri mikroploče su A, B i C kao primjer.

Izravna metoda: otkrivanje adsorpcije humanog IgG na površini mikropločice

Metoda sendviča s dvostrukim antitijelima: antigen u serumu pozitivan na anti-ljudska antitijela

Kao što se može vidjeti na gornjoj slici, u ove tri vrste bioenzimskih ploča, mikroploča klase A ima bolji učinak adsorpcije proteina, ali također poboljšava osjetljivost adsorpcije proteina, što može dati pouzdanije eksperimentalne podatke. Osim toga, možete pitati o ploči razlike serije. Slijedi šaržna razlika određene ploče. Kao što se može vidjeti iz dijagrama podataka o razlikama unutar serije, mikroploča ima dobru stabilnost između serija, a razlika u koeficijentu varijacije unutar serije (CV) je oko 5,0%, što je znatno niže od koeficijenta varijacije unutar serije ispod 10,0% u standardu kontrole kvalitete za kliničku imunološku reakciju. Stoga je prikladan i za ELISA pokuse.