R ecovery

1. Izvadite smrznutu epruvetu iz tekućeg dušika i odmah je stavite u vodenu kupelj na 37 ℃ uz lagano protresanje. Nakon što se tekućina otopi (oko 1-1,5 minuta), izvadite alkohol i stavite ga na ultra-čisti radni stol.

2. Stavite suspenziju stanica u epruvetu za centrifugiranje od 15 ml s 10 ml medija (operite smrznutu epruvetu s medijem i operite sve stanice koje su zalijepljene za stijenku) i centrifugirajte na 1000 5 minuta.

3. Supernatant je obrnut i dodan je 1 ml medija da se suspendiraju stanice. Zadimite u posudu od 10 cm s 10 ml medija i lagano protresite lijevo i desno kako biste ravnomjerno rasporedili stanice u posudi.

4. Označite tip stanice i datum, ljudsko ime i tako dalje, stavite u CO2 inkubator, zalijepite stanice i promijenite medij.

5. Medij je mijenjan jednom svaka 3 dana.

P assage

1. Biljke su pasirane do 80-90% pokrivenosti.

2. Abup izvorni medij .

3. Dodajte odgovarajući tripsin (samo pokrijte stanice) i probavljajte 1-2 minute .

4. Digestija je prekinuta dodavanjem jednakog volumena medija koji je sadržavao serum .

5. Ispuhajte stanice pištoljem za pipetu i ostavite ih sve suspendirane.

6. Stanice su aspirirane u epruvetu za centrifugu od 15 ml i centrifugirane na 1000 5 minuta.

7. Ulijte supernatant i dodajte 1-2 ml medija da napuhate sve stanice.

8. Stanice su proslijeđene u nekoliko posuda s kulturama, ovisno o vrsti stanica. Općenito, stanice raka podijeljene su u 5 stanica i prenose se tri normalne stanice. Nastavite se kultivirati.

Slobodno probaviti stanice i centrifugirati ih (ibid. gore).

Suspendirajte stanice s odgovarajućom otopinom za smrznuto skladištenje, podijelite ih u steriliziranu epruvetu za zamrzavanje, ostavite nekoliko minuta i odredite vrstu ćelije i datum smrznutog skladištenja. 4 ℃ 30 min, -20 ℃ 30 min, -80 ℃ preko noći i zatim pohranjen u perfuziju tekućeg dušika.

Priprema otopine za krioprezervaciju: 70% medij 20% FBS 10% DMSO. DMSO treba dodavati polako i stalno mućkati.